Segunda Parte

Te invito a leer el siguiente texto introductorio... Léelo a tu ritmo, no te preocupes.

¿CÓMO VER LAS BACTERIAS?

TÉCNICA DE COLORACIÓN DE GRAM

Puesto que las bacterias son los organismos más pequeños, simples e incoloros que existen, nadie los puede ver sino mediante tinciones o coloraciones especiales y la ayuda de microscopios con mil aumentos o más. Sin embargo, son el reino de los organismos más numerosos del planeta.

Un método sencillo para ver baterías, consiste en colocar medios nutritivos (por ejemplo agar) expuestos al medio ambiente. El medio nutritivo deberá tener un fungicida, para que no haya contaminación por hongos. Después de un tiempo, el medio nutritivo expuesto, queda contaminado de una o más especies de bacterias. Este medio nutritivo contaminado se coloca en una mufla de ambiente estéril y temperatura constante, hasta que se desarrollen colonias visibles en el sustrato. Cada tipo de colonia corresponde a una especie de bacteria diferente. Luego se procede a cultivar cada especie por separado y si se desea, se identifica o se determina y se rotula.

Para ver una especie de bacteria, se destapa levemente el recipiente de cultivo junto a la llama de un mechero prendido, para prevenir el posible escape de esporas o bacterias al aire. Se toma una muestra con un asa metálica, deslizándola sobre el sustrato. Se cierra el recipiente. Se frota la muestra en zigzag sobre un portaobjetos limpio y se quema el asa hasta rojo vivo para descontaminarla.

Se coloca el porta objetos con la muestra (frotis) sobre un puente de coloración en un lavaplatos. Se cubre el frotis con el colorante cristal violeta (CV), dejando que penetre las células durante un minuto. Se lava el exceso de colorante con un chorro de agua destilada. Luego se cubre el frotis con lugol durante un minuto. El yodo (I) del lugol, enlaza el magnesio (Mg) bacterial (si la bacteria lo produce) con el cristal violeta (CV). Se lava el exceso de lugol con un chorro de agua destilada. Se cubre el frotis con una solución de alcohol-cetona al 95% por 10 a 15 segundos, para eliminar el colorante aplicado, si la bacteria no formó el complejo Mg-I-CV. Este paso es crítico. Los frotis menos dispersos, requerirán más tiempo que los bien dispersados. Se lava el exceso de solución, con un chorro de agua destilada. Se cubre el frotis con safranina, que es un segundo colorante rojo, por un minuto. Este colorante teñirá a las bacterias que se decoloraron, si las hay, haciéndolas contrastar con las bacterias que retienen el color azul violeta. Se lava el exceso de colorante con un chorro de agua destilada.

Finalmente hay que secar la muestra de bacterias a la temperatura ambiente. Se monta el frotis al microscopio sin utilizar cubre objetos. Se enfoca en menor aumento y progresivamente en mayores aumentos hasta 400X. Luego se cubre la muestra con aceite de inmersión y se enfoca en 1.000X. Con aumentos entre 400X y 1000X, es posible ver los grupos o colonias de bacterias, en forma de racimos (estafilococos), de cubos (sarcinas) u otras; las bacterias libres (no agrupadas: cocos o bacilos)); las que se presentan en pares o duplas (diplococos o diplobacilos); las que se presentan en grupos de a cuatro (tétradas); las que se presentan como rosarios (estreptococos o estreptobacilos). También es posible ver el color de la pared celular, la presencia o ausencia de esporas al interior de la bacteria y el protoplasma o interior celular.

Para ver más detalles como por ejemplo organelos (ribosomas, retículo o nucleoide), se requiere microscopio electrónico y metodologías más específicas. A los cultivos bacteriales se les puede hacer estudios bioquímicos, por ejemplo, de sus productos metabólicos y su utilidad para proceder a la obtención industrial de enzimas, medicinas y productos de diferente utilización.

Las bacterias cuyas paredes resultaron teñidas de azul, violeta o colores similares, son las especies Gram Positivas. Las especies que se colorean de rojo, rosado o similares, son las Gram Negativas. El nombre de esta técnica de coloración viene de Cristian Gram, un danés que se inventó este método de tinción hace más de 130 años. Aún tiene vigencia y aplicación, porque las bacterias Gram positivas que causen infecciones, son susceptibles a las penicilinas y al jabón tenso activo. En cambio las Gram negativas, son susceptibles a las estreptomicinas y no responden a los detergentes. Por lo tanto, hacer la prueba diagnóstica, posibilita un tratamiento más efectivo.

PALABRAS CLAVES

Cómo ver bacterias; coloración de Gram; tinciones bacteriales; coloraciones bacteriales; medios nutritivos; agar; mufla; colonias bacteriales; frotis; puente de coloración; cristal; alcohol-cetona; safranina; estafilococos; sarcinas; cocos; bacilos; diplococos; diplobacilos; tétradas; estreptococos; estreptobacilos; esporas de bacterias; bacterias Gram Positivas; bacterias Gram Negativas; Cristian Gram.